生物素標(biāo)記的原理
標(biāo)記的化學(xué)方法
活化生物素:常用的活化生物素試劑有生物素 - N - 羥基琥珀酰亞胺酯(biotin - NHS)。NHS 酯可以與紅景天苷分子上的伯氨基反應(yīng)。首先將生物素 - NHS 溶解在合適的有機(jī)溶劑(如二甲基亞砜,DMSO)中,使其達(dá)到一定的濃度,比如 1 - 10mg/mL。
反應(yīng)條件:將紅景天苷溶解在適當(dāng)?shù)木彌_液(如磷酸鹽緩沖液,PBS,pH 7 - 8)中,然后緩慢加入活化的生物素溶液。反應(yīng)通常在室溫或者 4℃下進(jìn)行,反應(yīng)時(shí)間可能需要幾個(gè)小時(shí)到一天不等,具體取決于反應(yīng)的活性和濃度等因素。在反應(yīng)過程中,需要通過適當(dāng)?shù)臄嚢杌蛘哒袷巵泶_保反應(yīng)充分進(jìn)行。
分離純化:反應(yīng)完成后,需要對(duì)生物素標(biāo)記的紅景天苷進(jìn)行分離純化??梢允褂弥鶎游觯ㄈ绻枘z柱層析、反相高效液相色譜等)的方法,根據(jù)標(biāo)記和未標(biāo)記分子在極性、分子量等方面的差異將它們分開。通過監(jiān)測流出液的吸收峰(例如利用紅景天苷的特征吸收波長)來收集含有生物素標(biāo)記紅景天苷的組分。
標(biāo)記后的應(yīng)用
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