FITC - 倍他米松磷酸鈉的合成過程主要包括以下步驟:
以 9β,11β- 環(huán)氧 - 16β- 甲基孕甾 - 1,4 - 二烯 - 17α,21 - 二醇 - 3,20 - 二酮為起始物料的合成方法:首先進(jìn)行氟化反應(yīng),接著進(jìn)行酯化反應(yīng),最后成鹽得到倍他米松磷酸鈉,總收率 79.9%,產(chǎn)品結(jié)構(gòu)經(jīng)質(zhì)譜、氫譜確證.
以商業(yè)可得倍他米松為起始物料的合成方法:先對倍他米松 C21 位的羥基進(jìn)行甲磺?;又鴮⒓谆酋;苌锱c磷酸二叔丁酯鉀進(jìn)行關(guān)鍵的磷酸化反應(yīng),然后在溫和酸性條件下水解二叔丁酯中間體,最后成鹽,以多公斤級規(guī)模得到了純度≥99.9% 的 HPLC 的倍他米松磷酸鈉,總收率為 68%.
活性基團(tuán)的選擇:FITC 分子中的異硫氰酸根是具有較高反應(yīng)活性的基團(tuán),能夠與倍他米松磷酸鈉分子上的羥基、氨基等活性基團(tuán)發(fā)生特異性共價(jià)結(jié)合反應(yīng),形成穩(wěn)定的硫脲鍵或氨基甲酸酯鍵等。通常會選擇倍他米松磷酸鈉上具有合適空間位阻和電子效應(yīng)的活性基團(tuán),以確保偶聯(lián)反應(yīng)具有較高的選擇性和效率 。
反應(yīng)條件的優(yōu)化:偶聯(lián)反應(yīng)一般在適當(dāng)?shù)木彌_溶液中進(jìn)行,以維持反應(yīng)體系的 pH 值穩(wěn)定,通常 pH 值在 7-9 之間較為適宜,這樣可以保證 FITC 和倍他米松磷酸鈉的活性基團(tuán)都處于較好的反應(yīng)活性狀態(tài)。反應(yīng)溫度一般控制在較低的范圍,如 4-10℃,以減緩反應(yīng)速度,便于更好地控制反應(yīng)進(jìn)程,減少副反應(yīng)的發(fā)生。反應(yīng)時(shí)間則根據(jù)具體的反應(yīng)體系和反應(yīng)物濃度而定,一般需要數(shù)小時(shí)至數(shù)十小時(shí)不等,通過薄層色譜法或高效液相色譜法等手段監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程,當(dāng) FITC 與倍他米松磷酸鈉的偶聯(lián)反應(yīng)達(dá)到預(yù)期程度時(shí),及時(shí)終止反應(yīng) 。
純化與鑒定:反應(yīng)結(jié)束后,需要對產(chǎn)物進(jìn)行純化,以去除未反應(yīng)的 FITC、倍他米松磷酸鈉以及其他雜質(zhì)。常用的純化方法包括柱層析、凝膠過濾、高效液相色譜等。通過這些方法,可以根據(jù)產(chǎn)物與雜質(zhì)在物理化學(xué)性質(zhì)上的差異,將它們有效地分離,得到純度較高的 FITC - 倍他米松磷酸鈉產(chǎn)物。最后,使用光譜學(xué)方法如紫外 - 可見吸收光譜、熒光光譜以及質(zhì)譜等對純化后的產(chǎn)物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定,確保合成的產(chǎn)物為目標(biāo)化合物 FITC - 倍他米松磷酸鈉,并確定其純度和結(jié)構(gòu)完整性 。
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